Floride La guerre entre l'Espagne et la France s'était répandue en Amérique du Sud et dans les Caraïbes, et les deux nations tournaient leur attention vers le Sud-Est parce qu'elle était parallèle à la route suivie par les galions espagnols à leur retour en Espagne. Les dirigeants français connaissaient la légende de Chicora, et ils se sont concentrés sur le sud du bas pays comme site de leur prochaine tentative de construction d'une colonie. En 1562, le chef protestant Jean Ribault quitta le port du Havre avec deux navires, un équipage de marins expérimentés, de vétérans et quelques nobles. Lorsqu'ils ont aperçu la Floride, ils ont vu une terre qui n'avait pas été visitée par les Européens depuis près de vingt ans. En tournant vers le nord, Ribault a débarqué son parti près de l'actuelle Jacksonville, où la population du Mississippien de la région a accueilli les nouveaux arrivants. En retour, Ribault offrit à leur chef une robe bleue ornée de la fleur de lis française. Voyant les bijoux en or portés par les Indiens, qu'ils avaient récupérés sur les épaves, et confondant les chenilles des tentes pour les vers à soie, les Français crurent avoir enfin trouvé la riche terre de Chicora. Ribault a passé les semaines suivantes à naviguer vers le nord, à faire du commerce avec la population locale et à cartographier les différentes baies et rivières. Chargé d'explorer uniquement la région, lui et ses hommes ont néanmoins décidé de construire une colonie qu'ils ont appelée Charlesfort à l'actuel Port Royal, en Caroline du Sud. Quand Ribault s'embarqua pour la France, il laissa trente hommes pour garder le paradis huguenot. Les colons, cependant, ne savaient pas comment se nourrir, et ils se sont rapidement empêtrés dans une relation avec une chefferie voisine où ils ont reçu de la nourriture en échange de biens tels que des perles, des miroirs, du tissu et du métal. Mais ce n'était pas assez. La famine engendra des conflits internes et les colons se disputèrent bientôt. En 1564, les hommes en avaient assez et ils décidèrent de construire un bateau et de rentrer en France. Le voyage a été dur; la nourriture était faible; et ils ont cannibalisé un membre d'équipage pour survivre, mais juste au moment où la côte française est apparue, un navire anglais s'est approché du navire qui fuyait, et le capitaine a saisi les prisonniers au nom de la reine Elizabeth I.
Voyage of Laudonnière. Quand Ribault est revenu en France, il a trouvé les catholiques et les huguenots de nouveau en guerre, il est donc allé en Angleterre pour solliciter le soutien de Charlesfort. La reine Elizabeth I était favorable à la cause protestante, mais elle a décidé de mettre en prison le Français. Pendant ce temps, en France, René Goulaine de Laudonnière a pris la charge de l'effort des Huguenots pour fonder des colonies, et en 1564, lui et son équipage partent pour la Floride. Il navigua avec trois navires et un groupe de gentilshommes huguenots, des ouvriers, des artisans, quelques femmes et quelques Africains libres. Le groupe de Laudonnière débarqua près du site de Charlesfort, et un groupe de quatre cents Indiens sortit à leur rencontre. Le fil de la conversation, a écrit un Français, était centré sur la formation d'une alliance:
«Ils se sont assis ensemble et ont fait des pancartes exprimant à M. de Laudonnière à quel point ils étaient heureux que nous soyons venus. . . et qu'il doit aller à la guerre avec eux contre leurs ennemis. . . . » Le chef local Saturnia, cependant, s'est méfié des Français, a tenu des négociations avec Laudonnière et fidèle à la diplomatie amérindienne, a persuadé le Français de faire de la colonie de Fort Caroline un affluent de sa chefferie et de lui fournir un soutien militaire en cas de besoin. . Saturnia n'attend pas longtemps pour faire appel à ses nouveaux alliés pour leur soutien dans une guerre contre une chefferie voisine, mais Laudonnière traîne les pieds et renie l'accord qu'il avait conclu. Éloignés de leurs alliés natifs, incapables de trouver de trésor et manquant de nourriture adéquate, les colons se sont insatisfaits. Trois mutineries ont dissipé les ressources de la colonie et ont averti les Espagnols que les Français étaient installés dans leur propre cour. Ribault, après sa libération d'Angleterre, revient dans la colonie avec plusieurs soldats et un ordre de soulager Laudonnière, mais il ne parvient pas à rétablir l'ordre dans la colonie. Peu de temps après son arrivée, les voiles d'une force espagnole dirigée par Pedro Menéndez de Avilés apparurent à l'horizon. À la fin de 1565, ses troupes exterminèrent les huguenots, détruisirent le fort Caroline et poursuivirent leurs efforts pour coloniser la Floride.